Transport av terapeutiske
makromolekyler i kreftvev
Det blir tilbudt 4 oppgaver med denne
problemstillingen
Veiledere: Catharina Davies
(tel 93688), Ingunn Tufto (tel 93712), Arne Erikson (tel 93634)
Oppgave 1: Diffusjon av ladete makromolekyler i geler.
Diffusjon er den primære transportmekanismen dersom det høye interstitielle væsketrykket umuliggjør transport av molekyler basert på trykkgradienten. I denne oppgaven blir geler benyttet som en modell for extracellulær matrix i en svulst. Betydningen av ladning på makromolekylene skal studeres. Gelene inkuberes med fluorescensmerkede IgG som anioniseres og kationiseres. Diffusjon måles med” fluorescence recovery after photobleaching” (FRAP).
Formål: Strukturen av ekstracellulær matrix er av stor betydning for makromolekylers evne til å penetrere gjennom vevet. Vi ønsker å sammenlikne strukturen av collagen i ulike typer normalt vev og kreftvev å se om vi kan bestemme en karakteristisk parameter (2. ordens susceptibilitet) for vevet som reflekterer collagenstrukturen. Videre vil vi undersøke i hvilken grad en eventuell slik parameter kan korreleres med opptaket av makromolekyler i vevet.
Metode: Generering av andre harmoniske signal er vist å gi god avbildning av collagen. Med andre harmonisk signal menes her at to fotoner med en gitt frekvens eksiteres samtidig og emitterer til et foton med den dobbelte frekvensen (eller halve bølgelengden). Dette skjer uten absorpsjon eller andre former for emisjon slik at energien er bevart. Kun spesielle molekylære strukturer, såkalte ikke-sentrosymmetrisk strukturer er i stand til å generere andre harmoniske signal. Collagen er et av få proteiner som kan generere det 2. harmoniske signalet. Ved å benytte to-foton mikroskopi og måle emittert lys ved den halve bølgelengden skal strukturen av collagen avbildes og 2.ordens susceptibilitet bestemmes.
Oppgave 3: Effekten av enzymene collagenase og hyaluronidase på
cellesyklusfordeling
Formål: Det er rapportert om forsøk som tyder på at enzymene collagenase og hyaluronidase som bryter ned ekstracellulær matrix også har celleulære effekter. Vi ønsker å kartlegge om enzymene påvirker cellesyklusfordelingen og induserer apoptose i celler som gror som monolag og som sfæroider.
Metode: Cellesyklusfordeling og apoptose vil bli målt med flow cytometri.
Oppgave 4: Transfeksjon av cellelinjen OHS
med ”green fluorescent
protein” (GFP)
Formål og metode: Vi ønsker å transfektere osteosarcom cellelinjen OHS med et plasmid slik at cellene uttrykker GFP. Transfekterte kreftceller celler som er fluorescerende vil lett kunne skilles fra normalt vev. Dette ønsker vi å benytte i tumorer som gror i transparente vinduskammer i mus